三種凝膠法常用方法：試管法、玻片法及毛細吸管法的介紹

凝膠法常用的方法有三種，即試管法、玻片法及毛細吸管法。

1. 試管法

將等量的被檢樣品與鱟試劑加入試管，混勻，放入水浴中讓其充分反應，然后取出觀(guān)察凝膠形成的情況。實(shí)驗時(shí)共需作四種試管，即試驗管、陽(yáng)性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管。

試驗管：取標本0.1ml+鱟試劑0.1ml。一般的標本如水、注射液等，實(shí)驗前不須加以處理，但血液及腹腔滲出液等實(shí)驗前必須加以處理，因為在這些標本中可能會(huì )有LT（Limulus test，鱟試劑法）反應的抑制物質(zhì)。應用的鱟試劑應事前以標準內毒素進(jìn)行標定，并認為是可用的。

陽(yáng)性對照管:標準內毒素0.1ml+鱟試劑0.1ml。標準內毒素用前應以WHO標準品標定。所用的內毒素濃度按鱟試劑的敏感性而定，一般為1～5 ng/ ml。

陰性對照管:無(wú)熱原水0.1ml+鱟試劑0.1ml。

抑制對照管:標本0.1ml＋標準內毒素0.1ml+鱟試劑0.2ml。

上述四管均放入37℃孵育1～2小時(shí)觀(guān)察結果。如形成凝膠堅固，試管倒轉180度不變形，則記為（++）；如混濁度和粘滯性明顯增加，呈膠體狀，但傾斜試管時(shí)變形，則記為（+）；如液體流動(dòng)自如，透明無(wú)變化或稍混濁，有少量顆粒細絮片狀物，則記為（-）。

如被檢樣品中有抑制物存在，則可將檢品作適當的稀釋或經(jīng)各種處理以除去抑制物，再次測試。如這些方法無(wú)效，亦可采用其它內毒素檢測法，如RT（Rabbit pyrogen test，家兔熱原實(shí)驗）法。

2. 玻片法

鑒于試管法耗費鱟試劑量多，結果判定不易標準化，需用時(shí)間較長(cháng)等缺點(diǎn)，Frauch于1974年首先創(chuàng )用了玻片法。將10μl鱟試劑與已處理過(guò)的被檢樣品10μl滴于無(wú)菌無(wú)熱原的玻片上，充分混勻，水平放置37℃30分鐘，取出觀(guān)察結果。如標本中含有內毒素，則混合物形成凝膠，倒轉玻片時(shí)混合物不流動(dòng)，觸之較結實(shí)。反之則說(shuō)明樣本中不含內毒素或內毒素含量過(guò)低。

Goto等于1977年對此法進(jìn)行了兩點(diǎn)改進(jìn)。①增加鱟試劑及樣品的量，所用量各為20μl。由于Frauch法僅用10μl的鱟試劑及10μl的被檢標本，量太少，且形成凝膠后其體積更小，不易判斷結果。故各增加鱟試劑及被檢標本量1倍，這樣結果判定更正確、容易些。②使用不含硅的玻片。由于硅玻璃組成的玻片，滴加在其上的液體可向四周擴散，而顯得不規則。不含硅的玻片可使滴加在其上的液體保持穩定，不向四周擴散，這樣，為結果的判斷提取了方便。

3. 毛細吸管法

此法由瑞典學(xué)者Gardi于1980年首先創(chuàng )用。將10μl被檢標與10μl鱟試劑滴于無(wú)菌無(wú)熱原的載玻片上，充分混勻，然后以毛細吸管吸入其內（一般為2/3的高度），水平37℃孵育45-60分鐘，取出毛細吸管，再浸入溴酚染料中2～3秒鐘，取出即可判斷結果。如染料能進(jìn)入毛細吸管，則說(shuō)明樣品中無(wú)內毒素或所含的內毒素量低于鱟試劑檢測的敏感度記為（-）；如有堅固凝膠形成以致染色不能浸入，即說(shuō)明樣本含有內毒素，記為（+）。此法敏感性高、操作簡(jiǎn)便、所需試劑量少、孵育時(shí)間短，結果判斷較客觀(guān)。

我們實(shí)驗室于1982-1983年間應用毛細吸管微量測定法對臨床的多種標本進(jìn)行了內毒素檢測，結果較為滿(mǎn)意，認為此法值得在臨床上廣泛推廣。

目前，日本已有專(zhuān)門(mén)的內毒素微量檢測管出售，這種毛細吸管內已裝有微量的凍干鱟試劑，只需將此管插入液相標本，取出孵育一定的時(shí)間后即能判斷結果。